《GB/T 23495-2009 食品中苯甲酸、山梨酸和糖精鈉的測(cè)定 高效液相色譜法》

一、樣品提取

準(zhǔn)確稱(chēng)取牛奶10 g于50 ml離心管中，加入0.25 mol/L的亞鐵氰化鉀溶液2 ml，搖勻，再加入1 mol/L的乙酸鋅溶液2ml，搖勻，4000 r/min 離心10min。上清液待凈化。

二、SPE 柱凈化（MAX，60 mg/3 mL）

活化：MAX固相萃取柱使用前用3ml甲醇、3ml水活化。

上樣和洗脫：在MAX固相萃取柱上加入5ml備用樣液，棄去流出液。用3ml 2%氨水-水溶液、3ml甲醇淋洗，棄去淋洗液；抽干小柱；用2ml 5%甲酸-甲醇溶液洗脫，收集洗脫液（整個(gè)上樣、洗脫過(guò)程保持流速 1 ml/min）。重新溶解：洗脫液過(guò)0.45 μm 濾膜，上機(jī)測(cè)試。

三、標(biāo)準(zhǔn)曲線溶液的制備

取適宜濃度的標(biāo)準(zhǔn)品，用水配制成上機(jī)濃度分別為10ug/ml、20ug/ml、50ug/ml、100ug/ml的標(biāo)點(diǎn)，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線。

四、儀器條件

設(shè)備：Agilent Technologies 1200Series

色譜柱：C18 (4.6 mm×250 mm, 5 μm)

檢測(cè)器：紫外檢測(cè)器

檢測(cè)波長(zhǎng)：230 nm

流動(dòng)相：A：乙腈     B：磷酸鹽緩沖溶液（分別稱(chēng)取 2.5 g磷酸二氫鉀和磷酸氫二鉀，加水溶解定容到 1000 ml）

洗脫方式：等度洗脫，A: B=10: 90

柱溫：室溫

流速：1.0 mL/min

進(jìn)樣體積：20 μL

進(jìn)樣時(shí)間：12min

五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果

表1 0.1mg苯甲酸的添加回收結(jié)果

                                     圖1 甲酸-甲醇溶液液相色譜圖                                                                  圖2 50μg/ml苯甲酸標(biāo)準(zhǔn)品液相色譜圖

                                  圖3 添加量0.1mg苯甲酸液相色譜圖                                                                       圖4 苯甲酸標(biāo)準(zhǔn)曲線